萊克多巴胺/瘦肉精檢測方式
萊克多巴胺(Ractopamine,RAC)簡介
萊克多巴胺(ractopamine,RAC)是人工合成的 β-腎上腺受體激動劑,屬於「瘦肉精」的一種,可同時提高動物的日增品質、飼料利用率與蛋白質含量。目前僅美國、加拿大、巴西等 24 個美洲與亞太國家允許將萊克多巴胺應用於食用性動物(主要為豬與牛)以促進生長與提高瘦肉率。
萊克多巴胺屬於激素類添加劑,使用後可能殘留於動物體內,並可能產生副作用,同時對消費者健康構成風險。歐盟已明確禁止在食用性動物中使用包括萊克多巴胺在內的所有 β-腎上腺素興奮劑類藥物(歐盟 96/22/EC 法令)。
檢測方式
1. 免疫分析方法
免疫分析方法利用抗原與抗體特異性反應為基礎,主要技術包括酶聯免疫法、膠體金免疫層析法、螢光微球免疫層析技術與時間分辨螢光免疫分析等。
1)酶聯免疫法(ELISA)
ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)基於競爭性酶聯反應,結合抗原抗體特異性與酶催化特性。應用於動物性食品中萊克多巴胺檢測,最低可達 0.1 ng/mL,回收率 70%~90%。ELISA 具有快速、高通量、靈敏等優勢,常作為大量樣品初篩方法,但假陽性較多,需以 GC-MS 或 LC-MS 進行確證。
2)膠體金免疫層析技術(GICA)
GICA(gold immunochromatography assay)是一種快速檢測技術,以膠體金標記抗原或抗體形成免疫複合物。研製的試紙條可於 8~10 分鐘完成檢測,濃度約 5 ng/mL,肉眼可判讀。具快速、靈敏、不需儀器等優點,適合大規模現場檢測。
3)螢光微球免疫層析技術
此技術比膠體金方法具有更高靈敏度,檢測濃度約 2.5 ng/mL,具高度特異性與寬廣檢測範圍。
4)時間分辨螢光免疫分析技術(TRFIA)
TRFIA(time-resolved fluoroimmunoassay)使用鑭系元素標記抗原或抗體,利用時間分辨技術量測螢光,有效排除背景干擾,靈敏度高於 ELISA,穩定性也更佳,已出現用於萊克多巴胺檢測的研究案例。
2. 層析分析技術
層析分析為萊克多巴胺檢測中常用的定量與確證技術,包括高效液相層析(HPLC)、氣相層析-質譜(GC-MS)與液相層析-質譜(HPLC-MS 或 LC-MS)。
1)高效液相層析法(HPLC)
HPLC 檢測萊克多巴胺多以 SPE 固相萃取小柱淨化,並使用 DAD 或 FLD 偵測。由於其 UV 最大吸收約 224 nm,干擾較大,DAD 不常使用;因萊克多巴胺具螢光性,FLD(激發 226 nm/發射 305 nm)更適用,可達檢出 0.3 μg/L,並排除雜質干擾。
2)氣相層析–質譜(GC-MS)
因萊克多巴胺含羥基與氨基,不易氣化,需先衍生化(常用 BSTFA、BSTFA+1%TMCS,80℃,1 hr)。GC-MS 對豬肝的檢出與定量濃度分別為 0.5 ng/g、2.0 ng/g;豬尿則為 0.3 μg/L、1.0 μg/L。GC-MS 是最常用的確證技術,但衍生效率影響大,回收率偏低,且衍生劑毒性強。
3)液相層析–質譜(LC-MS/LC-MS/MS)
液相質譜不需衍生化,並以內標法提高定量準確度。UPLC-ESI MS/MS 檢測牛肉中萊克多巴胺的檢出與定量濃度分別為 0.07 μg/kg、0.22 μg/kg。LC-MS 具高靈敏度與重現性,但設備昂貴、成本高。
3. 感測器技術
1)生物感測器技術
表面等離子體共振(SPR)感測器將可與待測物結合的物質固定於晶片上,樣品流過時引起光學變化並形成電訊號。可於 15 分鐘內完成單一檢測,檢出濃度 0.6 μg/kg,樣品量少、無需標記、可即時監測,方法建立簡單。
2)電化學感測器技術
以 Nafion-Au-Nafion 修飾玻碳電極建立迴圈伏安法,在 pH2.0、富積時間 120s、掃描速度 50 mV/s、電位 1.1V 下,檢出濃度可達 2 μg/L,檢測時間不超過 5 分鐘。
4. 分子印跡技術
分子印跡技術利用範本分子與聚合物單體的多重作用點進行「記憶」,範本移除後形成具選擇性的空穴,可特異性識別目標物。廣泛應用於固相萃取、酶聯免疫及電化學感測等萊克多巴胺檢測技術。
5. 光譜技術
近年光譜技術應用於萊克多巴胺檢測的進展包括 SERS(表面增強拉曼光譜)與太赫茲時域光譜。SERS 檢測豬尿時,樣品經 LLE 或 LLE-SPE 處理後可達 0.8 μg/mL 與 0.4 μg/mL 的檢測濃度,具快速、製備簡單等特點。
6. 化學發光法
利用鹼性介質中萊克多巴胺對魯米諾–鐵氰化鉀體系的增敏作用,建立流動注射–化學發光法。相對發光強度與萊克多巴胺濃度在 0.004~0.8 μg/mL 範圍呈線性,檢出濃度為 2.5 μg/kg。
資料來源:石晶,王毅謙,吳福平,郭暘.動物性食品中萊克多巴胺檢測方法研究進展[J].肉類研究,2013,27(04):44–47.