基於細胞的測定是藥物發現和開發的支柱。然而，有這麼多不同類型的細胞檢測方法可供選擇，您如何選擇適合您的實驗需求的一種？本文著眼於這些檢測中最受歡迎的一些檢測、它們之間的相互關係以及如何在其中進行選擇。 為什麼是基於細胞？ 使用基於細胞的測定使我們能夠探討化合物或遺傳或環境變化對基因表現或蛋白質分泌的影響。 Molecular Devices 應用團隊高級經理 Oksana Sirenko 解釋說，它可以在全細胞層面觀察更複雜的事件，例如細胞分裂、細胞凋亡或細胞死亡。 可以對正常原代細胞或永生化細胞系、編輯或轉染的細胞、患者來源的細胞或幹細胞來源的細胞進行測定。它們可以在 2D 或 3D 培養物或單細胞懸浮液上進行。一般來說，統一因素是測定是在（通常）完整的活細胞體外進行的，而不是裂解物或萃取物。他們尋找功能變化，儘管這些變化可以透過生化手段來測量。 它還活著（還是是？） 最常見的基於細胞的測定只是計算存在的活細胞的數量。 「主要目標通常只是測量細胞活力，但對於幾乎所有其他基於細胞的測定來說，了解實驗結束時有多少細胞都是有幫助的，」Promega 細胞健康科學大使 Terry Riss 說。 「你可能想知道有多少活細胞，或有多少死細胞。或者如果它們死了，它們是怎麼死的——是細胞凋亡事件嗎？所有這些資訊都是理解基於細胞的檢測的其他方面的關鍵。 活力的經典定義是基於膜的完整性。當細胞最終死亡時，其細胞膜開始滲漏，細胞內所含的物質可以逃逸到細胞培養基中，例如胞質酶乳酸脫氫酶 (LDH)。透過添加由 LDH 轉化為可量化產物（例如螢光或發光）的底物，可以估計異質群體中非存活細胞的數量。 同時，培養基中被排除在活細胞以外的染料或底物等物質現在可以進入細胞膜完整性受損的細胞中。例如，所謂的「活體染料」（例如碘化丙啶和台盼藍）進入細胞，表示細胞無活力。 許多檢測都是基於這樣一個事實：隨著細胞死亡，代謝活動會減弱然後停止。四唑 (MTT)

光譜技術在生物樣品的製備和評估中發揮著重要作用。紫外-可見光譜和熒光光譜是兩種常用的技術，在不同的應用中各有各的優勢。但是，雖然這些方法可以單獨成功使用，但兩種技術的結合可以提供更深入的見解。那麼下次，與其選擇一種技術或另一種技術，為什麼不選擇兩者呢？ 紫外可見分光光度計 紫外-可見 (UV-Vis) 光譜法依賴於測量吸收的紫外光或可見光波長並與參考樣品或空白進行比較。對於許多實驗室來說，該技術的關鍵優勢在於其成本、速度和可訪問性。正如 DeNovix 市場開發經理 Andrew Jones 所解釋的那樣，紫外-可見分光光度法“直接測量分析物，因此無需購買檢測試劑或設置標準曲線，因此該方法快速有效，每個樣品的成本為零” ”。瓊斯表示，再加上該儀器易於使用，並且在許多實驗室中都很常見，這意味著“吸光度通常是大多數樣品定量的首選方法”。 另一個主要優點是該技術是非破壞性的。安捷倫科技公司分子光譜學生物製藥營銷總監 Ursula Tems 表示：“在許多情況下，生物應用需要使用小批量、難以獲得或昂貴的核酸、蛋白質或樣品。”允許樣品重複使用或進入下游處理是一個關鍵的好處。 這些優勢意味著 UV-Vis 的兩個廣泛應用是在細菌培養中進行常規光密度 (OD) 測量，以及快速確定 DNA 和 RNA 純度，這兩者對於下游實驗的成功至關重要。“DNA 樣品中提取過程中殘留的污染物（例如鹽、苯酚或蛋白質）的存在可能會干擾下游處理，因此輕鬆識別這些污染物可以節省研究人員因實驗失敗而導致的時間和費用。” 熒光 相比之下，熒光光譜法通過兩種方法之一進行工作。它可以利用許多生物分子（例如蛋白質和核酸）的固有熒光來測量其發射度，或者作為間接測量