傳統上，細胞分選已被用於開發基於細胞的分析，例如那些參與評估潛在候選藥物的分析。然而，近年來，細胞分選已被用於許多其他應用，這主要是由新型分選技術的出現推動的。在仔細研究研究人員採用的一些較新的替代方法之前，本文簡要回顧了已建立的細胞分選方法。 細胞分選技術的使用呈爆炸式增長 根據 Akadeum 首席執行官兼聯合創始人 Brandon H. McNaughton 博士的說法，科學界正處於歷史上一個獨特的時刻，技術進步和利用免疫系統進行研究相結合，診斷，甚至治療疾病。“正因為如此，細胞分選技術的使用呈爆炸式增長，在過去五年中大約翻了一番，”他報告說。“重要的是，細胞分選已經創造了對特定細胞類型的訪問——比如直接從組織或血液中提取的 B 細胞和 T 細胞——這對於研究基礎生物學、產生抗體和進行單細胞測序以及許多其他對改善人類健康至關重要的應用。” NanoCellect WOLF 細胞分選儀高級產品經理 Mandana Farhadi 對此表示贊同，並補充說免疫腫瘤學和細胞治療等新研究領域對分選細胞的需求增加。“為了適應研究人員不斷變化的需求，細胞分選儀必須不斷發展，”她說。“例如，多組學方法的出現強調了樣品製備的重要性。上市的新型儀器旨在促進傳統細胞分選方法可能存在局限性的現代工作流程。” 最終，能夠可靠地純化活細胞群以實現有針對性的研究或開發目標，有助於為從罕見病和傳染病到神經退行性疾​​病和癌症的各種疾病提供有效的治療方法。 成熟的方法仍然很受歡迎 成熟的細胞分選技術，包括磁激活細胞分選 (MACS)，仍然受到研究人員的歡迎。Thermo Fisher Scientific 的高級產品經理 Angie

所有類型的流式細胞術（傳統流式細胞術、光譜流式細胞術和質譜流式細胞術）的創新正在推動其在多組學（基因組學、轉錄組學和蛋白​​質組學）研究中用於分選、收集和分析細胞。Biocompare 最近舉辦了一次Bench Tips 網絡研討會 ，積極參與使用細胞術的科學家討論了他們如何利用技術進步進行各種研究應用。他們分享了與樣品製備、實驗設置和數據分析相關的經驗和最佳實踐，以幫助獲得準確和可重複的結果。以下是網絡研討會的一些重要知識。 流式細胞術是一種用於分類和分析給定細胞群中細胞數量和類型的技術。傳統的流式細胞術使用在窄光譜中捕獲的熒光標記細胞，而全光譜流式細胞術，顧名思義，捕獲整個光譜中發出的熒光，並提供有關細胞群的更多信息。 使用哪種細胞計數技術？ 隨著不斷改進和新的細胞分選選項，問題始終是使用哪種儀器？答案通常歸結為生物學問題和預算限制。然而，研究人員總是很想知道他們的選擇將如何影響實驗的設計和運行，以及所獲得數據的質量和完整性。傳統和光譜細胞儀之間的區別在於如何從熒光團中捕獲發射。對於整個光譜中的所有熒光團，光譜細胞術不僅僅是查看峰值發射，而是捕獲來自所有激光器的發射。因此，獲得的信息更加全面和完整。這也允許分離具有相似發射曲線的熒光團，這是傳統細胞儀無​​法做到的。 質譜流式細胞儀是下一代流式細胞儀。它是飛行時間質譜 (TOF-MS) 的改編版，其中重金屬標記的抗體用於標記單個細胞上的蛋白質。金屬標記的顆粒越重，飛行時間和洗脫時間越長。質量和傳統流式細胞儀在實驗運行方式方面具有相同的工作流程。然而，質譜流式細胞術沒有光譜重疊，因為它使用金屬標籤而不是熒光團，並且數據採集時間要慢得多。 Laura Ferrer Font 博士是 Malaghan 醫學研究所的高級科學家和高維光譜細胞儀專家，他進行了一項 研究，看看是否可以使用全光譜細胞儀與質譜細胞儀識別相同的細胞群。使用 UMAP 算法的發現顯示了兩種技術的相似數據圖，這意味著正在識別相同的細胞群。結果驗證了使用不同的算法可以得到相同的結果，這使團隊相信光譜流和質譜流式細胞術都會產生相似的結果。 流式細胞儀的四大支柱 無論使用何種技術，樣品製備、面板設計、面板優化和數據分析對於任何流式細胞術實驗都至關重要。 樣品製備 樣品製備首先要有高質量的單細胞懸液，這是任何細胞分選或單細胞測序實驗的先決條件。優化消化方案和試劑非常重要。“細胞的消化很重要，因為它會影響細胞數量、細胞活力和細胞完整性，”Ferrer Font 解釋說。“如果你有很多碎片或者很多細胞已經死亡，那麼結果將是不可靠的。” 面板設計與優化 面板設計和將正確的熒光團分配給正確的標記是流式細胞術的下一個重要步驟。“設計高維全光譜流式細胞儀面板可能會讓人不知所措，”Ferrer Font 指出。“在紙上設計面板很容易，但有時相同的設計在細胞儀中不起作用。” 面板設計包括了解細胞生物學、了解儀器和光譜特徵，以及為每個標記分配正確的熒光團。在她的演講中，她分享了一些關於如何設計和優化全光譜流式細胞儀面板的提示和技巧，並概述了從在紙上製作一組標記到獲得準備好的數據所需的所有步驟 -用於分析算法。（面板設計和優化也包含在 2020 年的論文中由費雷爾字體創作。） “按照優化設計規則設計面板後，使用真實樣本優化面板非常重要，”Ferrer-Font 補充道。（網絡研討會中共享的光譜細胞儀面板優化指南也可以在2021 年的這篇論文中找到。）面板優化涉及滴定抗體，以及評估參考對照、標記分辨率和數據質量。 抗體組設計和金屬標籤的選擇對於決定大規模細胞術實驗的成功也很重要。明尼蘇達大學醫學系