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Waters Alliance 2695
Alliance系統的核心是Waters 2695分離模組。2695是基於2690分離模組先進的溶劑和樣品管理集成結構,並針對使用者的迫切需求進行了大量的設計革新。Alliance系統中的2695分離單元設計可與 Empower / MassLynx 軟體協同工作,還包括Symmetry和Xterra色譜柱,多種可選的檢測器(包括Micromass的ZQ?和Quattro micro質譜檢測器)。整個系統得到Connections?的支援(Waters獨有的服務支援程式),以達到完美的性能和效率。
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2022 年 8 月 16 日
蛋白 A 捕獲色譜的替代品
Posted by newpowersadmin /
下游生物加工的第一步是通過離心或深度過濾進行收穫,以去除培養物中的細胞碎片,同時最大限度地減少產品損失。第二步,捕獲,專門從所有其他可溶性組分中去除所需產物,例如用過的培養基、副產物以及細胞和成分衍生的雜質。用於抗體捕獲的蛋白 A 樹脂的主導地位幾乎是既定的,但非免疫球蛋白治療性蛋白的出現正在導致逐漸轉向其他方式。
“對於單克隆抗體,使用蛋白 A 或蛋白 G 親和介質最容易實現捕獲,它們對 mAb 的 Fc 區域具有高度特異性,”安捷倫科技應用化學家 Andrew Coffey 博士說。“對於其他分子類型,找到對靶蛋白具有相似高特異性的親和介質可能更加困難。在某些情況下,可以設計一種蛋白質以結合合適的標籤,例如多組氨酸標籤或穀胱甘肽 S-轉移酶。”
這些物質與具有特定功能的親和樹脂結合,例如在多組氨酸標記的情況下固定化金屬如 Ni 2+ ,或固定化穀胱甘肽用於 GST 標記的蛋白質。
開發時間、成本
設計一種基於非標準樹脂的新型純化工藝涉及開發時間和成本,有些方法可能會向監管機構發出危險信號,他們認為“產品就是工藝”。規模化開發肯定會涉及更多資源的支出,但創新公司將繼續嘗試,因為正如 Coffey 指出的那樣,“親和媒體通常是下游加工中最昂貴的成本。”
當缺乏合適的親和介質時,生物處理器可能會轉向肽和蛋白質的陽離子交換層析,或寡核苷酸的陰離子交換層析。“基於離子交換的純化沒有那麼具體,通常更好地保留在拋光步驟中,”Coffey
細胞分選技術:既定方法和新方法
Posted by newpowersadmin /
傳統上,細胞分選已被用於開發基於細胞的分析,例如那些參與評估潛在候選藥物的分析。然而,近年來,細胞分選已被用於許多其他應用,這主要是由新型分選技術的出現推動的。在仔細研究研究人員採用的一些較新的替代方法之前,本文簡要回顧了已建立的細胞分選方法。
細胞分選技術的使用呈爆炸式增長
根據 Akadeum 首席執行官兼聯合創始人 Brandon H. McNaughton 博士的說法,科學界正處於歷史上一個獨特的時刻,技術進步和利用免疫系統進行研究相結合,診斷,甚至治療疾病。“正因為如此,細胞分選技術的使用呈爆炸式增長,在過去五年中大約翻了一番,”他報告說。“重要的是,細胞分選已經創造了對特定細胞類型的訪問——比如直接從組織或血液中提取的 B 細胞和 T 細胞——這對於研究基礎生物學、產生抗體和進行單細胞測序以及許多其他對改善人類健康至關重要的應用。”
NanoCellect WOLF 細胞分選儀高級產品經理 Mandana Farhadi 對此表示贊同,並補充說免疫腫瘤學和細胞治療等新研究領域對分選細胞的需求增加。“為了適應研究人員不斷變化的需求,細胞分選儀必須不斷發展,”她說。“例如,多組學方法的出現強調了樣品製備的重要性。上市的新型儀器旨在促進傳統細胞分選方法可能存在局限性的現代工作流程。” 最終,能夠可靠地純化活細胞群以實現有針對性的研究或開發目標,有助於為從罕見病和傳染病到神經退行性疾病和癌症的各種疾病提供有效的治療方法。
成熟的方法仍然很受歡迎
成熟的細胞分選技術,包括磁激活細胞分選 (MACS),仍然受到研究人員的歡迎。Thermo Fisher Scientific 的高級產品經理 Angie
qPCR 和 dPCR:優勢和最佳用途
Posted by newpowersadmin /
使用 PCR 擴增 DNA 是當今實驗室的一項基礎技術,創新不斷將其應用範圍從研究實驗室擴展到臨床。定量 PCR (qPCR) 允許對靶 DNA 進行相對定量,並提供一種可靠、成熟的測試特定序列是否存在的方法(例如,大多數基於 PCR 的冠狀病毒測試使用 qPCR)。PCR 的另一種形式,數字 PCR (dPCR) 或液滴數字 PCR (ddPCR),使用類似的化學方法檢測 DNA 序列,但在許多微小體積或液滴中進行檢測,利用數學的力量提高信噪比。
qPCR
實驗室培養箱維護和保養
Posted by newpowersadmin /
培養箱是任何完成細胞培養的實驗室的重要設備;它們支持所有基於單元的工作流程。但是,保持孵化器處於最佳工作狀態需要定期清潔和維護。雖然找到時間來完成這項工作可能具有挑戰性,但有幾個最佳實踐可以幫助您在日常生活中簡化這種維護。
小心放置您的孵化器
Thermo Fisher Scientific 的高級全球應用科學家 Mary Kay Bates 解釋說,減輕您的持續維護需求的最簡單方法之一是在安裝時戰略性地放置您的培養箱。她說,培養箱應遠離“人流量大的區域,避免潮濕、潮濕的角落,並避開通風和氣流”,所有這些都可以減少污染物進入的可能性。您還應該確保您的培養箱放在實驗室工作台或支架上,而不是直接放在地板上。如果安裝新的孵化器,儘早仔細考慮設備的放置可以為您節省寶貴的時間。
日常良好的家政服務
一旦您的孵化器就位,良好的日常內務管理使維護更容易,並使您的孵化器保持最佳狀態。始終如一的最佳實踐,例如不將物品存放在引擎蓋中和清潔任何溢出物,可以減輕較重的深度清潔的負擔。將日常任務分為早晚職責也有助於減少任何時期用於維護的時間。
可能你可以做的最重要的日常練習來維護你的孵化器是確保水盤是滿的。除了導致細胞毒性外,低水位還會損壞 CO 2傳感器。您還應該確保使用正確的水;“只能使用經過消毒的蒸餾水,”Bates 說,“去離子水或超純水俱有很強的腐蝕性,會隨著時間的推移對您的培養箱造成點蝕、混濁和腐蝕”。
制定維護清單
雖然良好的日常實踐會降低培養箱的維護水平,但仍需要一些持續的護理。列出需要完成的任務將使維護看起來更易於管理,並幫助您將雜務整合到您的日常實驗室實踐中。在你的實驗室小組之間分擔責任也減輕了一個人的負擔,佔用了每個人的時間。
如果您的培養箱配備了 HEPA 過濾器,您應該每 6-12 個月更換一次過濾器。除了您的孵化器使用水平和一般清潔度之外,使用壽命還取決於品牌和型號。進氣過濾器也應在同一時期更換,最多每季度校準一次。保持水盤裝滿可減少校準需要的頻率。
深層清潔!
定期清潔,雖然有時是一件苦差事,但對於保護您的細胞並保持您的培養箱正常運行是必要的。每月一次,每 6-8 週一次,您應該完全清空並清潔您的培養箱。應注意確保您到達任何可能隱藏污垢和細菌的角落或裂縫。帶有拱形角落的孵化器可以使這更容易。您還應該移除並清潔任何架子或貨架,並記得清潔培養箱的外部——特別注意經常接觸的門把手和表面。孵化器頂部的灰塵收集會在您打開門時進入,所以不要忘記清潔您的設備頂部。注意確保使用適當的消毒劑;“雖然有許多消毒劑可供選擇,但並非所有消毒劑對細胞或培養箱組件都是安全的,”貝茨補充道。稀釋的非腐蝕性消毒劑或 70% 的酒精是理想的。
一些培養箱配備了自動消毒程序,可以大大加快清潔過程,但仍應完成定期手動清潔。PHCbi 的產品專家 Ashwin Stallworth
多組學分析中的流式細胞術
Posted by newpowersadmin /
所有類型的流式細胞術(傳統流式細胞術、光譜流式細胞術和質譜流式細胞術)的創新正在推動其在多組學(基因組學、轉錄組學和蛋白質組學)研究中用於分選、收集和分析細胞。Biocompare 最近舉辦了一次Bench Tips 網絡研討會 ,積極參與使用細胞術的科學家討論了他們如何利用技術進步進行各種研究應用。他們分享了與樣品製備、實驗設置和數據分析相關的經驗和最佳實踐,以幫助獲得準確和可重複的結果。以下是網絡研討會的一些重要知識。
流式細胞術是一種用於分類和分析給定細胞群中細胞數量和類型的技術。傳統的流式細胞術使用在窄光譜中捕獲的熒光標記細胞,而全光譜流式細胞術,顧名思義,捕獲整個光譜中發出的熒光,並提供有關細胞群的更多信息。
使用哪種細胞計數技術?
隨著不斷改進和新的細胞分選選項,問題始終是使用哪種儀器?答案通常歸結為生物學問題和預算限制。然而,研究人員總是很想知道他們的選擇將如何影響實驗的設計和運行,以及所獲得數據的質量和完整性。傳統和光譜細胞儀之間的區別在於如何從熒光團中捕獲發射。對於整個光譜中的所有熒光團,光譜細胞術不僅僅是查看峰值發射,而是捕獲來自所有激光器的發射。因此,獲得的信息更加全面和完整。這也允許分離具有相似發射曲線的熒光團,這是傳統細胞儀無法做到的。
質譜流式細胞儀是下一代流式細胞儀。它是飛行時間質譜 (TOF-MS) 的改編版,其中重金屬標記的抗體用於標記單個細胞上的蛋白質。金屬標記的顆粒越重,飛行時間和洗脫時間越長。質量和傳統流式細胞儀在實驗運行方式方面具有相同的工作流程。然而,質譜流式細胞術沒有光譜重疊,因為它使用金屬標籤而不是熒光團,並且數據採集時間要慢得多。
Laura Ferrer Font 博士是 Malaghan 醫學研究所的高級科學家和高維光譜細胞儀專家,他進行了一項 研究,看看是否可以使用全光譜細胞儀與質譜細胞儀識別相同的細胞群。使用 UMAP 算法的發現顯示了兩種技術的相似數據圖,這意味著正在識別相同的細胞群。結果驗證了使用不同的算法可以得到相同的結果,這使團隊相信光譜流和質譜流式細胞術都會產生相似的結果。
流式細胞儀的四大支柱
無論使用何種技術,樣品製備、面板設計、面板優化和數據分析對於任何流式細胞術實驗都至關重要。
樣品製備
樣品製備首先要有高質量的單細胞懸液,這是任何細胞分選或單細胞測序實驗的先決條件。優化消化方案和試劑非常重要。“細胞的消化很重要,因為它會影響細胞數量、細胞活力和細胞完整性,”Ferrer Font 解釋說。“如果你有很多碎片或者很多細胞已經死亡,那麼結果將是不可靠的。”
面板設計與優化
面板設計和將正確的熒光團分配給正確的標記是流式細胞術的下一個重要步驟。“設計高維全光譜流式細胞儀面板可能會讓人不知所措,”Ferrer Font 指出。“在紙上設計面板很容易,但有時相同的設計在細胞儀中不起作用。” 面板設計包括了解細胞生物學、了解儀器和光譜特徵,以及為每個標記分配正確的熒光團。在她的演講中,她分享了一些關於如何設計和優化全光譜流式細胞儀面板的提示和技巧,並概述了從在紙上製作一組標記到獲得準備好的數據所需的所有步驟 -用於分析算法。(面板設計和優化也包含在 2020 年的論文中由費雷爾字體創作。)
“按照優化設計規則設計面板後,使用真實樣本優化面板非常重要,”Ferrer-Font 補充道。(網絡研討會中共享的光譜細胞儀面板優化指南也可以在2021 年的這篇論文中找到。)面板優化涉及滴定抗體,以及評估參考對照、標記分辨率和數據質量。
抗體組設計和金屬標籤的選擇對於決定大規模細胞術實驗的成功也很重要。明尼蘇達大學醫學系
脂質組學研究的工具和技術
Posted by newpowersadmin /
脂質同時是最簡單和最複雜的感興趣的生物分子。雖然蛋白質是由來自 5 個核苷酸的 21 個氨基酸和基因的組合構成的,但脂質中的主要重複單位是 -CH x -。當包括分支和不飽和(可能有順式和反式幾何形狀)時,存在幾乎無限數量的變化。有人可能會爭辯說代謝物在化學上更加多樣化,但這僅僅是因為它們完全來自其他分子類別。
不僅僅是“脂肪”
說“脂質”,有機化學家會想到脂肪、油或蠟,但脂質組比碳氫化合物主題的相關變化要多樣化得多。脂質組學公共資源LIPID MAPS ®結構數據庫 ( LMSD ) 包含 47,449 個獨特的脂質結構,使其成為世界上最大的脂質組學數據庫。截至 2022 年 4 月 1 日,LMSD 包含 47,449 種獨特的脂質結構,屬於八個分子類別:脂肪酸、甘油脂、甘油磷脂、鞘脂、甾醇脂、異戊烯醇脂、醣脂和聚酮化合物。
鍊長、位置異構化和功能化是脂質類別中三個明顯的結構特徵和化學分化點。幸運的是,它們也是用現代分析方法很容易區分的特徵。
由於脂質組學和代謝組學重疊,前者有時被稱為後者的子集。雖然重疊很重要,但由於實際原因,代謝物僅限於分子量低於